正确答案:

待扩增片段的序列是已知的，在片段两侧确定引物顺序 引物长度一般为15～30个核苷酸，但也可多至50个左右 引物中的碱基应随机分布，G＋C的含量宜在45%～55% 引物内部不应形成二级结构，避免在链内存在互补的序列

ABCD

题目：关于PCR引物设计的原理，下列叙述正确的是

解析：引物的延伸从3＇端开始，因此3＇端的几个碱基与模板DNA均需严格配对，不能进行任何修饰，否则不能进行有效的延伸，甚至导致PCR扩增完全失败。

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外-斐试验

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螺旋体

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