正确答案:

采用两对引物(外引物和内引物)对靶基因进行扩增，先用外引物扩增出目的基因的较大片段，然后用内引物进行第二次扩增，扩增出目的基因的较小片段

D

题目： 巢式PCR在临床检测中应用广泛。

解析：巢式PCR采用两对引物(外引物和内引物)对靶基因进行扩增，先用外引物扩增出目的基因的较大片段，然后用内引物进行第二次扩增，扩增出目的基因的较小片段，采用两对引物进行两次PCR扩增。外引物扩增的序列较长，内引物扩增的序列位于外引物扩增序列之内，扩增的序列较短。

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